中国耳鼻咽喉头颈外科 ›› 2022, Vol. 29 ›› Issue (4): 239-.

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喉癌N6-甲基腺嘌呤甲基化修饰差异基因的初步筛查与验证

  

  • 出版日期:2022-04-28 发布日期:2022-05-16

  • Online:2022-04-28 Published:2022-05-16

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摘要： 目的　分析喉癌中N 6 - 甲基腺嘌呤（N 6 -methyladenosine，m6A）甲基化修饰差异基因表达水平，探讨其在喉癌进展中的作用。方法　采用m6A-mRNA表观转录组芯片检测3对喉癌组织及相应癌旁组织中m6A甲基化修饰差异表达基因，并选择显著差异表达的含有6个跨膜BAX抑制子基序（transmembrane BAX inhibitor motif containing 6，TMBIM6）基因行逆转录实时定量PCR（RTqPCR）
、甲基化RNA免疫沉淀定量PCR（methylated RNA immunoprecipitation-qPCR，MeRIP-qPCR）及免疫组织化验证，最后检测其甲基化位点。结果 在差异表达基因和m6A甲基化基因的联合分析中，共获得135个高甲基化高表达基因，2958个高甲基化低表达基因，129个低甲基化高表达基因，682个低甲基化低表达基因。对显著高表达的TMBIM6基因行RT-qPCR、MeRIP-qPCR和免疫组化验证结果与基因芯片一致，鉴定出TMBIM6基因甲基化位点位于3'非编码区的2222碱基位。结论　TMBIM6基因通过m6A修饰机制在喉癌中发挥癌基因的作用，可望成为喉癌的分子标记物及潜在的治疗靶点。

关键词: 喉肿瘤, 逆转录聚合酶链反应, 免疫组织化学, m6A甲基化修饰, 差异基因