摘要： 目的 探讨脂质代谢关键酶长链脂酰辅酶A合成酶4（ACSL4）在中耳炎中的表达变化，验证其是否通过促进铁死亡加剧炎症损伤。方法 将人中耳上皮细胞（human middle ear epithelial cells，HMEECs）分为5组：对照组（Control组）、模型组（LPS组）、对照转染组（LPS+sh-NC组）、ACSL4抑制组（LPS+sh-ACSL4组）和铁死亡激活组（LPS+sh-ACSL4+Erastin组）。选取同一批次6～8周龄雄性健康SD大鼠共50只，随机分为健康对照组（Ctrl组）、急性中耳炎模型组（AOM组）、ACSL4抑制组（sh-ACSL4组）、ACSL4抑制+铁死亡激活组（sh-ACSL4+Erastin组），每组10只，通过注射40 μl浓度为1.0 mg/ml的脂多糖（LPS）建立急性中耳炎（acute otitis media，AOM）大鼠模型，另取10只健康SD大鼠作为Ctrl组。对大鼠进行炎症评分。利用RT-qPCR和蛋白免疫印迹（Western blot，WB）检测各组细胞和中耳黏膜组织ACSL4的表达水平。利用CCK-8和流式细胞仪检测HMEECs细胞增殖和凋亡水平。采用HE染色检测大鼠中耳黏膜组织病变。利用试剂盒检测细胞和大鼠白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平，氧化应激相关指标包括丙二醛（malondialdehyde，MDA），谷胱甘肽（glutathione，GSH）及活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平以及Fe2+水平。利用WB检测细胞和大鼠中耳黏膜组织中铁死亡相关蛋白，4-羟基壬烯醛（4-hydroxynonenal，4-HNE），谷胱甘肽过氧化物酶 4（glutathione peroxidase 4，GPX4）及溶质载体家族7成员 11（solute carrier family 7 member 11，SLC7A11）蛋白表达水平。结果 细胞实验显示，LPS刺激显著降低细胞活性、GSH水平及SLC7A11、GPX4蛋白表达；同时增加细胞凋亡率，炎症因子（TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8）水平，氧化应激指标（ROS、MDA）及铁死亡标志物（4-HNE、Fe2+）水平（P 均<0.05）。抑制ACSL4（LPS+sh-ACSL4组）可逆转上述变化，而进一步激活铁死亡（LPS+sh-ACSL4+Erastin组）则再次恶化这些指标。动物实验中，AOM组大鼠的炎症评分、炎症因子、氧化应激指标、铁死亡标志物及ACSL4表达均显著高于健康对照组（P <0.05），GSH水平及SLC7A11、GPX4蛋白表达显著降低（P <0.05）。抑制ACSL4（sh-ACSL4组）可减轻炎症反应和铁死亡，而激活铁死亡（sh-ACSL4+Erastin组）则加剧这些病理变化。结论 ACSL4在中耳炎中表达上调，并通过促进脂质过氧化驱动铁死亡，进而加剧炎症损伤。